| Περίληψη: | Οι macro τομείς είναι συντηρημένες αλληλουχίες 130-190 αμινοξικών καταλοίπων και εντοπίζονται σε όλα τα βασίλεια της ζωής. Έχουν ανακαλυφθεί τα τελευταία 25 χρόνια και έως σήμερα έχουν επιλυθεί ποικίλες δομές macro, αποκαλύπτοντας την δομική τους συντήρηση. Υιοθετούν στο χώρο μία μικτή α/β/α δομή τύπου sandwich σχηματίζοντας μία υδρόφοβη κοιλότητα αλληλεπίδρασης με την ADP-ριβόζη καθώς και παραγώγων της. Οι ιικοί macro τομείς ανήκουν στην κατηγορία ενζύμων των ADP-ριβοζο-1΄΄-φωσφατασών και κατά το στάδιο της μόλυνσης του ξενιστή αφαιρούν μονο ή πολυ ADP-ριβόζη από πρωτεΐνες.
Ο ιός της Ηπατίτιδας Ε (Ηepatitis E Virus, HEV) είναι η πιο κοινή αιτία εμφάνισης οξείας ιογενούς ηπατίτιδας παγκοσμίως με 3 εκατομμύρια μολύνσεις ανά χρόνο. O HEV μπορεί να οδηγήσει σε χρόνια ηπατίτιδα και ηπατική κίρρωση. Σε αναπτυσσόμενες χώρες, ο ιός μεταδίδεται μέσω της κοπρανοστοματικής οδού ενώ σε αναπτυγμένες χώρες κυρίως μέσω μολυσμένων ζώων, κυρίως χοίρων. Η θεραπεία της μόλυνσης περιλαμβάνει είτε μονοθεραπεία ριμποβαρίνης είτε συνδυαστική θεραπεία με PEG IFN και ριμποβαρίνη. Ο macro τομέας εδράζεται στο αντιγραφικό σύμπλεγμα του ιού στο ανοιχτό πλαίσιο ανάγνωσης 1 (Open Reading Frame,ORF1) και αποτελείται από 147aa.
Στην παρούσα μεταπτυχιακή εργασία χρησιμοποιώντας μεθόδους μοριακής βιολογίας σε συνδυασμό με τη φασματοσκοπία Πυρηνικού Μαγνητικού Συντονισμού (Nuclear Magnetic Resonance, NMR), διερευνάται η παρασκευή και απομόνωση ενός πολυπεπτιδίου το οποίο, αντιπροσωπεύει τον macro τομέα του ιού της Ηπατίτιδας Ε, κατάλληλο για μελέτη των διαμορφωτικών και λειτουργικών ιδιοτήτων του macro τομέα. Πιο συγκεκριμένα, παρατίθενται τα πειράματα εύρεσης κατάλληλων συνθηκών έκφρασης και στην συνέχεια σταθερότητας/διαλυτότητας σε πληθώρα διαλυμάτων, διαφορετικού μεγέθους ανασυνδυασμένων πολυπεπτιδίων του macro τομέα του ιού της Ηπατίτιδας Ε.
|
|---|
