| Περίληψη: | Η πρωτεϊνοσύνθεση είναι μια θεμελιώδης διαδικασία του κυττάρου μέσω της οποίας παράγονται όλες οι πρωτεΐνες που απαιτούνται για τη λειτουργία και την επιβίωσή του. Διεκπεραιώνεται μέσω τριών διακριτών βημάτων, με το στάδιο της έναρξης να είναι το καθοριστικό για τον συνολικό ρυθμό της. Στην έναρξη της μετάφρασης συμμετέχει μια πληθώρα παραγόντων (eIFs) οι οποίοι υπόκεινται σε ρύθμιση από δύο σηματοδοτικά μονοπάτια, τα RAF/MEK/ERK και PI3K/AKT/mTOR. Αποτέλεσμα της ρύθμισης αυτής είναι να αναδιαμορφώνεται ο ρυθμός της σύνθεσης νέων πεπτιδίων. Στην πολυπλοκότητα της ρύθμισής της συμβάλλει μια πληθώρα ρυθμιστικών μη-κωδικών μορίων RNA τα οποία μπορούν να στοχεύσουν τη μετάφραση άμεσα, επιδρώντας σε παράγοντες αυτής, ή έμμεσα αλληλεπιδρώντας με μόρια-τελεστές των σηματοδοτικών μονοπατιών που την ελέγχουν. Η μεταγραφή αυτών των μορίων RNA, τα οποία μπορούν να είναι μικρού (microRNAs, tRNAs, tiRs, tRHs) ή και μεγάλου μεγέθους (long non-coding RNAs), ρυθμίζεται τόσο από την πρωτεΐνη KRAS όσο και από τον μεταγραφικό παράγοντα c-MYC που στρατολογείται απ’ την GTPαση. O c-MYC επηρεάζει τη μεταγραφή από όλες τις RNA πολυμεράσες ρυθμίζοντας με τον τρόπο αυτό την πρωτεϊνοσύνθεση σε μεταγραφικό επίπεδο.
Στην παρούσα διπλωματική εργασία μελετήθηκε η RNA-διαμεσολαβούμενη ρύθμιση της πρωτεϊνοσύνθεσης έπειτα από υπερέκφραση της μεταλλαγμένης πρωτεΐνης KRAS G12C σε κυτταρικές σειρές αδενοκαρκινώματος πνεύμονα. Η mKras2b G12C εντέθηκε σε πλασμιδιακό φορέα pEGFP-C1 με τον οποίο έπειτα διαμολύνθηκαν οι κυτταρικές σειρές Α549 και CL1-5. Χρησιμοποιώντας qPCR έγινε ποσοτικοποίηση μικρών και μεγάλων ρυθμιστικών μη-κωδικών μορίων RNA τα οποία ρυθμίζουν τον c-MYC (MycLos, let7), την KRAS (let7) καθώς και άλλων που εμπλέκονται στη ρύθμιση της πρωτεϊνοσύνθεσης (tRNAs, tRFs, tiRs) και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (miR-26, miR-92,miR-21, miR-411, TERC, MALAT1, GAS5, DANCR). Παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές ως προς την έκφραση της πλειοψηφίας των μη-κωδικών RNAs που μελετήθηκαν ανάμεσα στις δύο κυτταρικές σειρές. Στα CL1-5 εντονότερη ήταν η αύξηση των ογκογενών microRNAs και των ογκοκατασταλτικών let7, καθώς και των κυτταροπλασματικών και μιτοχονδριακών θραυσμάτων tRNA, με ηπιότερες μεταβολές στα Α549. Τέλος διαφορική βρέθηκε η έκφραση του c-MYC αφού υπερεκφράζεται σημαντικά στα Α549 ενώ παραμένει σχεδόν αμετάβλητος στα CL1-5. Τα αποτελέσματα υποδεικνύουν πως οι δύο κυτταρικές σειρές πιθανώς χρησιμοποιούν διαφορετικούς μηχανισμούς για τον RNA-διαμεσολαβούμενο επαναπρογραμματισμό της πρωτεϊνοσύνθεσης.
|
|---|
